| 更新時(shí)間： | 2025-01-01 |
| 型 號(hào)： | |
| 所屬分類： | 蛋白質(zhì)組學(xué)實(shí)驗(yàn) |
| 報(bào) 價(jià)： | 500 |
提供商: 上海研謹(jǐn)生物服務(wù)名稱: 多肽合成與修飾技術(shù)服務(wù)規(guī)格: 實(shí)驗(yàn)服務(wù) 價(jià)格： 500元
多肽合成與修飾技術(shù)服務(wù)
實(shí)驗(yàn)技術(shù)簡(jiǎn)介:多肽合成是一個(gè)固相合成順序一 般從C端 (羧基端)向N端(氨基端)合成。過(guò)去的多肽合成是在溶液中進(jìn)行的稱為液相合成法。從1963年Merrifield發(fā)展成功了固相多肽合成方法以來(lái),經(jīng)過(guò)不斷的改進(jìn)和完善，到今天固相法已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個(gè)常用技術(shù)，表現(xiàn)出了經(jīng)典液相合成法*的優(yōu)點(diǎn)，從而大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度。多肽合成總的來(lái)說(shuō)分成兩種:固相合成和液相多肽合成。
實(shí)驗(yàn)技術(shù)原理:
多肽合成儀以固相合成為反應(yīng)原理，在密閉的防爆玻璃反應(yīng)器中使氨基酸按照已知順序(序列，一般從C端-羧基端向N端-氨基端)不斷添加、反應(yīng)、合成，操作終得到多肽載體。固相合成法，大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度。為了防止副反應(yīng)的發(fā)生，參加反應(yīng)的氨基酸的側(cè)鏈都是保護(hù)的。羧基端是游離的，并且在反應(yīng)之前必須活化。
實(shí)驗(yàn)操作流程:
1、去保護(hù): Fmoc保護(hù)的柱子和單體必須用--種堿性溶劑(piperidine) 去除氨基的保護(hù)基團(tuán)。
2、激活和交聯(lián):下一個(gè)氨基酸的羧基被一種活化劑所活化。 活化的單體與游離的氨基反應(yīng)交聯(lián)，形成肽鍵。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅(qū)使反應(yīng)完成。循環(huán): 這兩步反應(yīng)反復(fù)循環(huán)直到合成完成。
3、洗脫和脫保護(hù):多肽從柱上洗脫下來(lái)，其保護(hù)基團(tuán)被一種脫保護(hù)劑 (TFA)洗脫和脫保護(hù)。
多肽修飾類型:
1、C端標(biāo)記技術(shù):
C端酰胺化(Amidation,C-termainal)
醛基化(Aldehydes) 、醇基化(Alcohols) 、pNA (P-Nitroanilide)
AMC、AFC、巰基乙胺化(Cysteamide) 、酯基化(Ester) 、N-烷基化(N-AlkyI Amides)等
2、N端標(biāo)記技術(shù):
乙?；疉cetylated (Acetylated) 、Palmytolyl、 HYNIC、 生物素標(biāo)記(Biotinylated)、 Br乙?；?Bromoacetylated)螯合反應(yīng)(DOTA, DTPA conjugated)、甲醛化(Formylated)、十四烷基、 十八烷基化(Myristoylated)琥珀?；?、棕櫚酸化、蘋果酸化、脂肪酸化等(Succinylated)
3、熒光標(biāo)記修飾:
C端修飾: AFC, AMC, Dap(Dnp), Lys(Dye), pNA, Rh110
N端修飾: Bodipy-FL, Cy3, Cy5, Texas Red, 5-Tamra, 5-odoacetamido fluoresceinRhodamine 110 and Rhodamine B Luciferin, EDANS
FAM, FITC, MCA, Rox, Sulforhodamine 101, 5-TAMRA
4、環(huán)化反應(yīng):
首尾成環(huán)，中間成環(huán)，特殊成環(huán)(N -> C or Head to Tail)
2對(duì)二_硫鍵，3對(duì)二 硫鍵(Disulfide (S-S bond formation) .Triulide formation)天然產(chǎn)物活性肽成環(huán)(Cyclic-natural peptides )
5、甲基化修飾:
側(cè)鏈甲基化Lys(For),LysS(Me), Lys(Me)2, Lys(Me)3, Arg(Me)2 symmetrical, D-Tyr(Me),D-Tyr(Et)N端甲基化(N-Me Arg,N-Me-Asp, N-Me-Glu, N-Me-Leu, N-Me-Nle, N-Me-Nva, N-Me-Phe, N-Me-S N-
Me-Ser, N-Me-Trp, N-Me-Thr, N-Me-Val)
6、幾種特殊修飾:
各種偶聯(lián)(BSA, KL H conjugated peptides for antibody production )、磷酸化 (Phosphoserine,Phosphothreonine, Phosphotyrosine)、磺化 (Sulfated Tyrosine or Serine)、MAPS (MultipleAntigenic Peptide)、糖肽(Glycopeptides)PEG修飾(PEGylation)
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
客戶提供:
1、多肽序列、數(shù)量、純度及特殊要求
2、凍干多肽可在-20度保存或室溫保存
3、溶液肽遠(yuǎn)比凍干形式不穩(wěn)定,溶液應(yīng)為中性PH (5-7) -20度保存。
4、為避免樣品的反復(fù)凍融，hao分成小樣存放。
交付標(biāo)準(zhǔn):
臺(tái)成多肽、數(shù)據(jù).
其他:
大多數(shù)多肽的首xuan溶劑是超純抽氣水，稀Z酸或氨水分別對(duì)堿性或酸性多肽的溶解也有幫助。如果這些方法用過(guò)后還不溶解的多肽，建議用DMF,脲，guanidiniam,chloride ,acetonitnle來(lái)溶解
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：
ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè) | CCK8檢測(cè) | 基因組DNA提取
| 蛋白相互作用分析 |
Western Blot
| 免疫組化 | 熒光定量PCR | 動(dòng)物模型服務(wù) |
流式細(xì)胞檢測(cè) | 細(xì)胞增殖 | 激光共聚焦 | DNA甲基化實(shí)驗(yàn) |
細(xì)胞劃痕 | 鈣離子濃度檢測(cè) | 掃描電鏡實(shí)驗(yàn) | microRNA 測(cè)序 |
動(dòng)物實(shí)驗(yàn) | Taqman探針 | ATP/ADP檢測(cè)
| 石蠟/冰凍切片 |
定點(diǎn)突變 | 線粒體膜電位(MMP)檢測(cè) | 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定 | 藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)
|
免疫共沉淀 | 真核表達(dá)載體構(gòu)建 | 染色質(zhì)免疫沉淀CHIP | 非標(biāo)定量（Label-free）實(shí)驗(yàn) |
業(yè)執(zhí)照.jpg)
