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豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體（IgG）試劑盒（酶聯(lián)免疫法） |
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豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）說明書 【產(chǎn)品名稱】 通用名稱：豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體（IgG）診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 英文名稱：Diagnostic Kit For Antibodies To Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus（PRRSV Ab）,ELISA 【規(guī)格】 96T×2/盒 【預期用途】 本試劑盒主要目的是測定豬血清中豬藍耳病毒抗體，可用于評估感染豬的血清學診斷以及豬藍耳病毒疫苗免疫狀況分析。 【檢驗原理】 本試劑盒應用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）原理，由包被有高純度的豬藍耳病毒抗原的微孔反應板、辣根過氧化物酶標記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應機理為包被抗原與樣本中的PRRSV-Ab結合，再與酶標抗豬IgG抗體形成“包被抗原+PRRSV-Ab+酶標抗豬IgG抗體”復合物，加入顯色劑，通過酶催化反應顯色。顯色深淺與PRRSV-Ab的量成正比，當樣本反應顯色后，經(jīng)酶標儀檢測所得結果超過設定的臨界值時結果判為陽性，即表明免疫產(chǎn)生了抗體或有自然感染存在。 【主要組成成份】
【自備器材】 1．酶標儀，雙波長450/630nm濾光片 2．微量移液器（單道1-100ul、0.5-10ul、多道30-300ul） 3．水浴箱或恒溫箱 4．微量振蕩器 5．一次性槍頭（10ul，200ul） 6．去離子水 【樣本要求】 1．本試劑檢測的樣本為豬血清，樣本應無菌采集，2℃～8℃貯存應不超過一周，長期應在-20℃以下保存。 2．避免使用嚴重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌及含疊氮鈉血清樣本。
【實驗準備】 1．試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實驗前，先取出置室溫30min，可以獲得ZUI-佳結果。. 2．樣本稀釋：用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40倍稀釋，稀釋的樣本混合均勻能取得較好結果。 3．配制洗滌液：將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍（例：將50ml洗滌液加入950ml去離子水中）。若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結晶，屬正?，F(xiàn)象，放置37℃至溶解后即可。 【檢驗方法】 1．加樣：根據(jù)樣本數(shù)量，取所需板條，檢測時，設陰、陽性對照各2孔，分別加入不用稀釋的陰、陽性對照血清100μl于相應孔中（可不設空白對照）。其余為樣本孔，每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本（可做單孔也可雙孔檢驗）。 2．溫育：加樣后，蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。 3．洗板：甩去孔內(nèi)液體，用洗滌液注滿反應板孔，靜置10s左右，直接甩出，洗滌3次，ZUI-后一次洗滌后拍干板內(nèi)液體。 4．加酶：每孔加酶標記物100μl。 5．溫育：加好酶標記物后蓋上蓋板膜，置37℃溫育30分鐘。 6．洗板：同步驟3。 7．顯色：每孔加顯色劑100μl，振蕩混勻，37℃避光反應10分鐘。 8．終止：每孔加終止液50μl，振蕩10秒，充分混勻，終止后即讀數(shù)。 9．讀數(shù)：以450nm/ 630nm雙波長檢測，讀取各孔吸光度值（OD值）。 【結果判定】 在酶標儀上測各孔的OD值。檢測結果有效的條件是陽性對照孔的平均OD值≥0.6，陰性對照孔的平均OD值必須＜0.15；樣品中抗體存在與否，或樣本中抗體的相對水平的高低由S/P值決定，S/P值計算時按以下方式處理: S/P=(樣本OD450/630值-NCx(—))/（PCx(—)-NCx(—))，其中NCx(—)表示陰性對照孔平均OD450/630值，PCx(—)表示陽性對照孔平均OD450/630值； 當樣本的S/P≥0. 2時判為陽性；樣品S/P值＜0.2時判為陰性； 若進行大量樣本檢測時，可使用試劑盒專業(yè)分析軟件進行分析數(shù)據(jù)結果，該軟件可登陸本公司*網(wǎng)站下載。 【注意事項】 1．本試劑盒僅供研究使用。 2．不要使用過期的試劑盒組分，不要把不用批次的組分混合使用。 3．使用試劑盒之前，一定要仔細閱讀說明書。 4．本試劑盒應按含有傳染性材料對待，試驗廢棄物應經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘，或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。 5．微孔板從冷藏環(huán)境中取出時應在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開，未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封2℃-8℃保存。未用完的液體試劑應蓋好瓶蓋，與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。 6．應用微量移液器加入樣本及試劑，并經(jīng)常校對其準確性。 7．加洗滌液時應做到滿而不溢，防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。 8．終止液有腐蝕性，若濺到皮膚或衣物上應立即用大量清水沖洗干凈。 【儲存條件及有效期】 于2℃～8℃避光保存，防止冷凍，有效期12個月。 【生產(chǎn)日期及批號】 詳見包裝袋和外包裝盒。 |
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