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大鼠腫瘤浸潤組織白細(xì)胞分離液試劑盒實(shí)驗(yàn)方法

點(diǎn)擊次數(shù)：2066 更新時(shí)間：2016-06-23

大鼠腫瘤浸潤組織白細(xì)胞分離液試劑盒實(shí)驗(yàn)方法

（細(xì)胞培養(yǎng)及分子生物學(xué)）

【產(chǎn)品規(guī)格】

200ml/Kit

【產(chǎn)品組成】

為方便廣大用戶使用，試劑內(nèi)容如下：

			名稱		產(chǎn)品編號(hào)		規(guī)格

	A	大鼠腫瘤浸潤組織白細(xì)胞分離液					200ml

	B	樣本稀釋液（贈(zèng)品）			2010C1119		200ml

	C	清洗液（贈(zèng)品）			2010X1118		200ml

	D	F 液（贈(zèng)品）			F2013TBD		200ml

	E	紅細(xì)胞裂解液（贈(zèng)品）			NH4CL2009		100ml

	F	說明書					1 份

【實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備】
A．適用儀器
	zui大離心力可達(dá) 1200g 的水平轉(zhuǎn)子離心機(jī)
B．耗材

	產(chǎn)品名稱			產(chǎn)品貨號(hào)		產(chǎn)地

	15ml 離心管散裝			339650		美國 NUNC

	15ml 離心管架裝			339651		美國 NUNC

	50ml 離心管散裝			339652		美國 NUNC

	50ml 離心管架裝			339653		美國 NUNC

	無菌膠頭滴管或塑料滴管

【檢驗(yàn)方法】

全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。

首先制備組織單細(xì)胞懸液，制備方法詳見“組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)”。

取一支 15ml 離心管，加入與制備的組織單細(xì)胞懸液等量的分離液（注：分離液zui少不得少于 5ml）。

用吸管小心吸取制備的組織單細(xì)胞懸液加于分離液液面上，400-500g，離心 20-30min。（注：根據(jù)組織單細(xì)胞懸液樣本量確定離心條件，組織單細(xì)胞懸液量越大，離心力越大，離心時(shí)間越長，具體離心條件需客戶自行摸索，以達(dá)到*分離效果）。

離心后用吸管小心吸取所有環(huán)狀乳白色細(xì)胞層（一層或兩層），加入 10 ml 清洗液（產(chǎn)品編號(hào)：2010X1118），混勻細(xì)胞。250g，離心 10min。重復(fù)洗滌 2-3 次，即得所需白細(xì)胞。

如有紅細(xì)胞殘留請使用紅細(xì)胞裂解液（產(chǎn)品編號(hào)：NH4CL2009）裂解紅細(xì)胞，具體操作方法詳見“紅細(xì)胞裂解液使用說明”。

【注意事項(xiàng)】

全過程樣本、試劑及實(shí)驗(yàn)環(huán)境均需在 20±2℃的條件下進(jìn)行。為獲得*的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在取樣 2h 內(nèi)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，樣品存放時(shí)間越長，細(xì)胞分離效果越差。樣品放置超過 6h 后分離效果更差甚至不能達(dá)到分離目的。

本實(shí)驗(yàn)不要使用高聚合材質(zhì)（如聚苯乙烯）的塑料制品，應(yīng)使用無靜電、低靜電離心管及未經(jīng)堿處理過后的玻璃制品，因?yàn)殪o電作用將導(dǎo)致細(xì)胞貼壁、堿處理的玻璃表面會(huì)變成毛面，影響細(xì)胞分離效果。

分離液用量大于制備的組織單細(xì)胞懸液樣本時(shí)，分離效果更佳。

如實(shí)驗(yàn)后細(xì)胞得率或活性過低，請上海研謹(jǐn)技術(shù)以尋求幫助。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

18-25℃保存，有效期 2 年。本品易感染細(xì)菌，需無菌條件操作。無菌條件下操作，啟

封后置常溫保存。如 4℃保存，本分離液易出現(xiàn)白色結(jié)晶，影響分離效果。

【參考值（參考范圍）】

本實(shí)驗(yàn)白細(xì)胞提取率及純度大于 80%。

下表為成年人外周血中各種細(xì)胞的數(shù)量及比例，用戶可適當(dāng)進(jìn)行參考。

	紅細(xì)胞		白細(xì)胞		血小板

		（4.0-10.0）×10⁹
含量（個(gè)/L）	（4.0-5.5）×10¹²	中性粒細(xì)胞	淋巴細(xì)胞	單核細(xì)胞	（1.0-3.0）×10¹¹
		50%-70%	20%-40%	3%-8%

【相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)方案】

1. 組織單細(xì)胞懸液制備技術(shù)

所獲得白細(xì)胞的培養(yǎng)技術(shù)。

所獲得白細(xì)胞的核酸提取技術(shù)。

所獲得白細(xì)胞的鑒定方法A.流式細(xì)胞技術(shù)
B.免疫組化技術(shù)
C.原位雜交技術(shù)

D.PCR 技術(shù)

注：上述技術(shù)方案詳情請登陸本公司搜索“細(xì)胞分離、

純化、擴(kuò)增、鑒定及生物治療技術(shù)手冊”，并在說明書項(xiàng)目欄下下載使用。

【可能存在的問題及解決方法】

1. 由于血液粘度、細(xì)胞密度等差異可能造成的問題及解決方案如下表所示：

出現(xiàn)情況	出現(xiàn)原因	建議解決方案

離心后目的細(xì)胞存在于血漿層或稀釋液層	轉(zhuǎn)速過小或離心時(shí)間過短	適當(dāng)增減轉(zhuǎn)速

離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時(shí)間過長
離心后目的細(xì)胞存在于分離液中	轉(zhuǎn)速過大或離心時(shí)間過長

離心后白環(huán)層彌散	細(xì)胞密度過大	調(diào)整細(xì)胞密度

離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小
離心后白環(huán)層太淺或看不見	細(xì)胞密度過小

本分離液分離細(xì)胞的原理為密度梯度離心，其密度與溫度、大氣壓等密切相關(guān)。不同地區(qū)客戶可根據(jù)當(dāng)?shù)厍闆r對離心條件進(jìn)行適當(dāng)調(diào)整。建議對離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，恒定離心時(shí)間，對離心轉(zhuǎn)速進(jìn)行調(diào)整。

本分離液依照標(biāo)準(zhǔn)，全部使用藥用級原料，性能指標(biāo)與國產(chǎn)同類產(chǎn)品略有不同，可

能出現(xiàn)紅細(xì)胞沉降不*的情況，可以適當(dāng)加大離心轉(zhuǎn)速。

注：在對離心條件進(jìn)行調(diào)整時(shí)，離心轉(zhuǎn)速的加減以 50-100g 為基數(shù)，直至達(dá)到*分離效果，

離心力zui小不得小于 400g，zui大不得大于 1200g。離心時(shí)間以 20-30min 為準(zhǔn)。

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楊小姐

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