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超純RNA提取試劑盒說明書
Ultrapure RNA Kit
目錄號：K0581
保存條件：Buffer RLT 2-8℃避光保存。其他組分室溫（15-25℃）保存。
組分說明
Cat. No. K0581
Kit Size 50
Buffer RLT 60 ml
Buffer RW1 40 ml
Buffer RW2（concentrate） 11 ml
RNase-Free Water 10 ml
Spin Column RM 50
Collection Tube（1.5 ml） 50
Collection Tube（2 ml） 50
本產(chǎn)品僅供科研使用，請勿用于臨床診斷及其他用途
產(chǎn)品簡介
本試劑盒是基于TRIzon改進(jìn)后的柱式總RNA提取試劑盒，裂解液充分裂解并勻質(zhì)
化樣本，采用*的硅基質(zhì)膜吸附技術(shù)，通過離心吸附柱在高鹽狀態(tài)下高效專一的結(jié)
合溶液中的RNA，同時最大限度的有效除去蛋白質(zhì)、無機(jī)鹽離子及有機(jī)雜質(zhì)等；可從
動物組織、植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中快速提取總 RNA，每次可處理
30-50 mg組織或5×10細(xì)胞，可同時處理多個不同樣品。本試劑盒提取得到的RNA可直
接應(yīng)用于RT-PCR、Northern6 Blot、Dot Blot、體外翻譯等實驗。
產(chǎn)品特點
·純度高：最大限度除去蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，提取的RNA可直接用于下游各種實驗。
·提取量大：*的裂解液配方，充分裂解細(xì)胞或組織，RNA提取量多至100 μg。
·快速：步驟少，操作簡單，節(jié)省時間。
·兼容性強(qiáng)：適用于多種動植物組織和細(xì)胞RNA的提取。
自備試劑：氯仿(新開封或提取RNA專用)、70%乙醇(無RNase水配制)、無水乙醇。
實驗前準(zhǔn)備及重要注意事項
1．預(yù)防RNase污染，應(yīng)注意以下幾方面：
1）使用無RNase的塑料制品和槍頭，避免交叉污染。
2）玻璃器皿應(yīng)在使用前于180℃高溫下干烤4小時，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸
泡10分鐘，用水*沖洗后高壓滅菌。
3）配制溶液應(yīng)使用無RNase的水。
4）操作人員戴一次性口罩和手套，實驗過程中要勤換手套。
2．樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則影響RNA提取得率和質(zhì)量。
3．使用前若發(fā)現(xiàn)Buffer RLT有沉淀，可置于56℃水浴幾分鐘，即可溶解。
4．第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽說明在Buffer RW2中加入無水乙醇。
5．所有離心步驟若無特殊說明均在室溫下進(jìn)行，且所有操作步驟動作要迅速。
6．若下游實驗對DNA非常敏感，建議用不含RNase的DNase I（貨號：K2090A）對
RNA進(jìn)行處理。
操作步驟
1．樣品處理
1a.植物組織：取新鮮植物組織在液氮中充分研磨或?qū)⒅参锝M織剪碎后直接在Buffer
RLT中迅速研磨，每30-50 mg組織加入1 ml Buffer RLT，混勻。
注意：樣品體積一般不要超過Buffer RLT體積的10%。
1b.動物組織：取新鮮或-70℃凍存的動物組織盡量剪碎，每30-50 mg組織加入1 ml
Buffer RLT，勻漿儀進(jìn)行勻漿處理?；蛟谝旱醒心ズ蠹尤?/span>Buffer RLT 1 ml混勻。
注意：樣品體積一般不要超過Buffer RLT體積的10%。
1c.單層培養(yǎng)細(xì)胞：吸去培養(yǎng)液，可直接在培養(yǎng)板中加入適量Buffer RLT（每10 cm 2
面積需要1 ml Buffer RLT），用取樣器反復(fù)吹打使細(xì)胞裂解。也可用胰蛋白酶處理后，
將細(xì)胞溶液轉(zhuǎn)移至RNase-Free的離心管中，300×g離心5 min，收集細(xì)胞沉淀，仔細(xì)
吸除所有上清，加入Buffer RLT 1 ml混勻。
注意：1）收集細(xì)胞數(shù)量不要超過1×107。
2）Buffer RLT加量根據(jù)培養(yǎng)板面積決定，不是由細(xì)胞數(shù)決定。如果Buffer RLT加量不足，可能導(dǎo)
致提取的RNA中有DNA污染。
3）收集細(xì)胞時一定要將細(xì)胞培養(yǎng)液去除干凈，否則會導(dǎo)致裂解不*，造成RNA的產(chǎn)量降低。
1d.細(xì)胞懸液：離心收集細(xì)胞。每5×106 -1×107動物、植物和酵母細(xì)胞或每107細(xì)菌
注意：細(xì)胞加入1）加入1 mlBuffer Buffer RLT RLT前不要洗。 滌細(xì)胞，以免RNA降解。
2）一些酵母和細(xì)菌細(xì)胞可能需要勻漿儀或液氮研磨處理。
1e.血液處理：直接取新鮮的血液，加入3倍體積的Buffer RLT（推薦0.25 ml全血加入
0.75 ml Buffer RLT），充分振蕩混勻。
1f.可選步驟：對于蛋白、脂肪、多糖或胞外物質(zhì)含量高的樣品，如肌肉組織、脂肪組
織或植物的塊莖，可以在勻漿處理后4℃，12,000 rpm（~13,400×g）離心10分鐘以除去不溶物質(zhì)，此時沉淀中含胞外物質(zhì)、多糖和高分子量的DNA，而RNA存在于上清中。
2．樣品中加入Buffer RLT后反復(fù)吹打幾次，使樣本充分裂解。室溫放置5分鐘，使蛋白
核酸復(fù)合物*分離。
3．以每1 ml Buffer RLT加入200 μl氯仿的比例加入氯仿，蓋好管蓋，劇烈振蕩15秒，
室溫放置2分鐘。
4．4℃ 12,000 rpm（~13,400×g）離心10分鐘，此時樣品分為三層：紅色有機(jī)相，中間層和上層無色水相， RNA主要在上層水相中，將上層水相移到一個新的 RNase-
Free離心管（自備）中。
5．在得到的水相溶液中加入等體積的70%乙醇（無RNase水配制），顛倒混勻。
6．將上步所得溶液全部加入到已裝入收集管（Collection Tube 2 ml）的吸附柱（Spin
Column RM）中。若一次不能加完溶液，可分多次轉(zhuǎn)入。12,000 rpm離心20秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
7．向吸附柱中加入700 μl Buffer RW1，12,000 rpm離心20秒，倒掉收集管中的廢液，
將吸附柱重新放回收集管中。
8．向吸附柱中加入500 μl Buffer RW2（使用前檢查是否已加入無水乙醇），12,000
rpm離心20秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱重新放回收集管中。
9．重復(fù)步驟8。
10．12,000 rpm離心2 分鐘，倒掉收集管中廢液。將吸附柱置于室溫數(shù)分鐘，*晾干。
注意：這一步目的是將吸附柱中殘余乙醇去除，乙醇?xì)埩魰绊懞罄m(xù)酶促反應(yīng)（酶切、PCR等）。
11．將吸附柱置于一個新的無RNase離心管（Collection Tube 1.5 ml）中，向吸附柱的
中間部位加入30-50 μl RNase-Free Water，室溫放置1分鐘，12,000 rpm離心1分鐘，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
注意：1）RNase-Free Wate體積不應(yīng)小于30 μl，體積過小影響回收率。
2）如果要提高RNA的產(chǎn)量，可用30-50 μl新的RNase-Free Water重復(fù)步驟11。
3）如果要提高RNA濃度，可將得到的溶液重新加入到吸附柱中，重復(fù)步驟11。
